@article { author = {Tahan, Maryam and Movahedian-Attar, Ahmad and Abbasian, Mahdi and Mofid, Mohammad Reza}, title = {Cloning and Expression of Epidermal Lipoxygenase from Ambystoma Mexicanum (LOXe) in Escherichia Coli}, journal = {Journal of Isfahan Medical School}, volume = {31}, number = {267}, pages = {2162-2170}, year = {2014}, publisher = {Isfahan University of Medical Sciences}, issn = {1027-7595}, eissn = {1735-854X}, doi = {}, abstract = {Background: Lipoxygenase enzymes play an important role in various mechanisms of organisms. So far, many studies on human and other organisms lipoxygenase activity have been conducted. In eukaryotes, this enzyme converts arachidonic acid to a variety of inflammatory mediators. For example, leukotrienes are products of this enzyme reaction. This inflammatory mediator plays an important role in the healing process. Recent studies have shown that the lipoxygenase enzyme extracted from an amphibious (Ambystoma mexicanum) is more effective in the healing process in comparison with human lipoxygenase. Like in the case of other enzymes, the first step for enzyme identification and characterization is to produce a large amount of purified enzyme, but the recombinant production of these proteins in bacterial expression system has not yet been reported. Therefore, in the present study we have cloned and expressed lipoxygenase axolotls (LOXe) in Escherichia coli (E. coli) BL21.Methods: The sequence encoding LOXe was designed based on the amino acid sequence of the protein and then, codon optimized in order to ensure the maximum expression in E. coli. At the next step, the synthetic DNA encoding LOXe inserted into the pUC57 vector using appropriate restriction sites and then, subcloned in the pET21-a, an expression vector in order to high production of the protein in bacteria. Recombinant vector transformed to E. coli BL21 as an expression host and expression of 71kDa protein LOXe (623 amino acids) was induced in the presence of IPTG (Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside).Findings: The cloning of LOXe was performed successfully and possibility of expression of this enzyme in E. coli was confirmed.Conclusion: Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis indicated that LOXe protein over-expressed successfully in E. coli cytoplasm.}, keywords = {Lipoxygenase,Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE),pET21-a}, title_fa = {همسانه‌سازی و بیان آنزیم لیپواکسیژناز پوستی Ambystoma mexicanum (LOXe) در باکتری Escherichia Coli}, abstract_fa = {مقدمه: آنزیم‌های لیپواکسیژناز نقش مهمی در انواع مکانیسم‌های موجودات زنده ایفا می‌کنند. تا کنون مطالعات زیادی بر روی عملکرد لیپواکسیژناز در انسان و سایر موجودات انجام گرفته است. فعال شدن این آنزیم در یوکاریوت‌ها و اثرگذاری روی سوبسترای خود (اسید آراشیدونیک) باعث تولید واسطه‌های گوناگونی می‌شود. یکی از محصولات واکنش این آنزیم لکوترین است. این واسطه‌ی التهابی نقش مهمی در فرایند ترمیم زخم ایفا می‌کند. مطالعات اخیر نشان داده ‌است که آنزیم لیپواکسیژناز LOXe استخراج شده از یک دوزیست (Ambystoma mexicanum) در مقایسه با لیپواکسیژناز انسانی تأثیری به مراتب بیشتر در فرایند بهبود زخم از خود نشان می‌دهد. تا به حال، همسانه‌سازی و بیان این ژن در باکتری انجام نشده است و از آن جا که اولین قدم برای شناسایی و تعیین ویژگی‌های هر پروتئین، در دست داشتن مقادیر زیادی از آن است، در تحقیق حاضر، همسانه‌سازی و بیان لیپواکسیژناز اکسولوتل (LOXe) مورد توجه قرار گرفت.روش‌ها: ابتدا توالی کد کننده‌ی لیپواکسیژناز اکسولوتل بر اساس توالی آمینو اسیدی پروتئین مورد نظر، طراحی و پس از بهینه‌سازی کدون‌ها برای بیان حداکثری در باکتری E. coli (Escherichia coli)، در ناقل pUC57 قرار گرفت. قطعه‌ی کد کننده‌ی سنتز شده پس از هضم با آنزیم‌های برشی مورد نظر، در چهارچوب خواندن ناقل بیانی pET21-a قرار داده شد و در میزبان بیانی BL21-E. coli برای بیان پروتئین 71 کیلو دالتونی LOXe (623 اسید آمینه) در حضور IPTG (Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside) القا گردید.یافته‌ها: کلونینگ LOXe با صحت انجام گرفت و بیان این آنزیم در باکتری E. coli امکان پذیر است.نتیجه‌گیری: آنالیز SDS-PAGE (Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis) نشان دهنده‌ی بیان فراوان پروتئین مورد نظر در مقایسه با نمونه‌ی شاهد بود. }, keywords_fa = {لیپواکسیژناز,Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,pET21-a}, url = {https://jims.mui.ac.ir/article_14224.html}, eprint = {https://jims.mui.ac.ir/article_14224_0d23450c6a4fb527c2a6506501e9ea1e.pdf} }