شناسایی و فراوانی گونه‌‌های کاندیدا در بیماران مبتلا به اشکال مختلف کاندیدیازیس در شهر اصفهان با استفاده از روش PCR-RFLP

نوع مقاله : مقاله های پژوهشی

نویسندگان

1 دانشجوی دکترای تخصصی، گروه قارچ شناسی پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس تهران، تهران، ایران

2 دانشیار، گروه انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشکده‌ی بهداشت و مؤسسه‌ی‌ ملی تحقیقات سلامت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران

3 استادیار، گروه قارچ شناسی پزشکی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

4 استاد، گروه قارچ ‌شناسی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران

5 کارشناس، مؤسسه‌ی ملی تحقیقات سلامت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران

چکیده

مقدمه: کاندیدیازیس بیماری قارچی شایعی است که توسط گونه‌‌های مختلف جنس کاندیدا ایجاد می‌شود. از آنجایی که روش‌های سنتی برای شناسایی این مخمر‌ها وقت‌گیر و در مواردی ناموفق است، تکنیک‌‌های جدید مولکولی مبتنی بر تفاوت‌های DNA رویکردی مفیدتر و دقیق‌تر است. هدف از مطالعه‌ی حاضر شناسایی گونه‌‌های رایج عامل ایجادکننده‌ی این بیماری و بررسی شیوع آن‌ها در شهر اصفهان با استفاده از روش PCR-RFLP بود.روش‌ها: DNAی ژنومی‌‌ مخمر از کشت تازه و با استفاده از فیلتر‌های FTA استخراج و ناحیه‌ی ITS1-ITS2 با روش PCR تکثیر و با استفاده از آنزیم محدودالاثر MspI برش داده شد. محصولات RFLP روی ژل آگارز الکتروفورز گردید و گونه‌ی مخمر بر حسب تفاوت الگوی باند‌‌های به دست آمده شناسایی شد.یافته‌ها: 182 جدایه از نقاط مختلف بدن مورد بررسی قرار گرفت. 86 جدایه (2/47 درصد) به عنوان کاندیدا آلبیکنس، 31 جدایه (17 درصد) کاندیدا پاراپسیلوزیس، 19 جدایه (4/10 درصد) کاندیدای کفیر (سدوتروپیکالیس)، 15 جدایه (2/8 درصد) کاندیدا تروپیکالیس، 14 جدایه (7/7 درصد) کاندیدا گلابراتا، 14 جدایه (7/7 درصد) کاندیدا کروزه‌ای و 3 جدایه (6/1 درصد) کاندیدا گیلیرموندی شناسایی شدند. در مجموع 2/47 درصد گونه‌‌های آلبیکنس و 8/52 درصد گونه‌‌ها غیر آلبیکنس بودند. نتیجه‌گیری: افزایش گونه‌‌های غیر آلبیکنسی به دلیل مقاومت‌‌های دارویی بیش‌تر آن‌ها به دارو‌های ضد قارچی نسبت به گونه‌ی آلبیکنس از موضوعات مهم عفونت‌های قارچی است که بیانگر ضرورت بررسی‌‌های دقیق‌تر اپیدمیولوژیک است. این مطالعه می‌تواند راه‌گشای محققان برای مطالعات کاربردی‌تر باشد. 

کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله [English]

Identification and Frequency of Candida Species in Patients with Different Forms of Candidiasis in Isfahan, Using PCR-RFLP Method

نویسندگان [English]

  • Rasoul Mohammadi 1
  • Hossein Mirhendi 2
  • Mohammad Hossein Yadegari 3
  • Shahla Shadzi 4
  • Nilufar Jalalizand 5
1 PhD Student, Department of Medical Mycology, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran.
2 Associate Professor, Department of Parasitology and Mycology, School of Public Health and National Institute of Health Research, Tehran University of Medical Sciences,Tehran, Iran.
3 Assistant Professor, Department of Medical Mycology, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
4 Professor, Department of Medical Mycology, School of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran.
5 National Institute of Health Research, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran.
چکیده [English]

Background: Candidiasis is a widespread fungal disease caused by different candida spp. Traditional methods for these yeasts, are time-consuming and in some cases are not successful. New molecular techniques based on differences in DNA targets are faster and more useful. The aim of this study was identification of the most medically common Candida species by PCR-RFLP analysis and their prevalence in Isfahan, central Iran.Methods: Yeast genomic DNA was extracted from living cultures using FTA-filters and ITS1-ITS2 region was amplified by PCR and was digested by the restriction enzyme MspI. RFLP products were loaded on agarose gel and yeast species were identified acorging to differences in their band patterns.Finding: One hundered and eighty two isolates were evaluated from different body locations comprising nail, vagina, groin, blood, wound etc, from which 86 isolates (47.2%) were identified as C. albicans, 31 (17%) as C. parapsilosis, 19 (10.4%) as C. kefyr, 15 (8.2%) as C. tropicalis, 14 (7.7%) as C. glabrata, 14 isolates (7.7%) as C. krusei, 3 isolates (1.6%) as C. guilliermondii. Totally 47.2% isolates were C. albicans and 52.8% isolates were non-albicans spp.Conclusion: Increasing of non-albicans species and their more resistance to antifungal drugs than C. albicans is an important topic of fungal infections that needed precise epidemiological surveys. This study can be a leader for more applicable studies.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Identification
  • Frequency
  • Candida
  • PCR-RFLP

مراجع

  1. Ayatollahi Mousavi S A, Khalesi E, Shahidi Bon-jar G H, Aghighi S, Sharifi F, Aram F. Rapid mo-lecular diagnosis for Candida species using PCR-RFLP. Biotechnol 2007; 6: 583-587.
  2. Tortorano AM, Peman J, Bernhardt H, Klingspor L, Kibbler CC, Faure O, et al. Epidemiology of candidaemia in Europe: results of 28-month Eu-ropean Confederation of Medical Mycology (ECMM) hospital-based surveillance study. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2004; 23(4): 317-22.
  3. Marchetti O, Bille J, Fluckiger U, Eggimann P, Ruef C, Garbino J, et al. Epidemiology of can-didemia in Swiss tertiary care hospitals: secular trends, 1991-2000. Clin Infect Dis 2004; 38(3): 311-20.
  4. Fridkin SK, Jarvis WR. Epidemiology of noso-comial fungal infections. Clin Microbiol Rev 1996; 9(4): 499-511.
  5. Pfaller MA. Epidemiology of candidiasis. J Hosp Infect 1995; 30(Suppl): 329-38.
  6. Kwok S, Higuchi R. Avoiding false positives with PCR. Nature 1989; 339(6221): 237-8.
  7. Elie CM, Lott TJ, Reiss E, Morrison CJ. Rapid identification of Candida species with species-specific DNA probes. J Clin Microbiol 1998; 36(11): 3260-5.
  8. Mirhendi H, Makimura K, Khoramizadeh M, Yamaguchi H. A one-enzyme PCR-RFLP assay for identification of six medically important Candida species. Nippon Ishinkin Gakkai Zasshi 2006; 47(3): 225-9.
  9. Cirak MY, Kalkanci A, Kustimur S. Use of mo-lecular methods in identification of Candida species and evaluation of fluconazole resistance. Mem Inst Oswaldo Cruz 2003; 98(8):1027-32.
  10. Ferrer C, Colom F, Frases S, Mulet E, Abad JL, Alio JL. Detection and identification of fungal pathogens by PCR and by ITS2 and 5.8S ribo-somal DNA typing in ocular infections. J Clin Microbiol 2001; 39(8): 2873-9.
  11. Borman AM, Linton CJ, Miles SJ, Campbell CK, Johnson EM. Ultra-rapid preparation of total ge-nomic DNA from isolates of yeast and mould using Whatman FTA filter paper technology - a reusable DNA archiving system. Med Mycol 2006; 44(5): 389-98.
  12. Shokohi T, Hashemi Soteh MB, Pouri ZS, He-dayati MT, Mayahi S. Identification of Candida species using PCR-RFLP in cancer patients in Iran. Indian J Med Microbiol 2010; 28(2): 147-51.
  13. Williams DW, Wilson MJ, Lewis MA, Potts AJ. Identification of Candida species by PCR and restriction fragment length polymorphism analy-sis of intergenic spacer regions of ribosomal DNA. J Clin Microbiol 1995; 33(9): 2476-9.
  14. Nho S, Anderson MJ, Moore CB, Denning DW.
  15. Species differentiation by internally transcribed spacer PCR and HhaI digestion of fluconazole-resistant Candida krusei, Candida inconspicua, and Candida norvegensis strains. J Clin Microbi-ol 1997; 35(4): 1036-9.
  16. Graybill JR, Najvar LK, Holmberg JD, Luther MF. Fluconazole, D0870, and flucytosine treat-ment of disseminated Candida tropicalis infec-tions in mice. Antimicrob Agents Chemother 1995; 39(4): 924-9.
  17. Irobi J, Schoofs A, Goossens H. Genetic identifi-cation of Candida species in HIV-positive pa-tients using the polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analy-sis of its DNA. Mol Cell Probes 1999; 13(6): 401-6.
  18. Okungbowa FI, Isikhuemhen OS, Dede AP. The distribution frequency of Candida species in the genitourinary tract among symptomatic individ-uals in Nigerian cities. Rev Iberoam Micol 2003; 20(2): 60-3.
  19. Sehgal SC. Epidemiology of male urethritis in Nigeria. J Trop Med Hyg 1990; 93(2): 151-2.
  20. Enweani IB, Ogbonna CI, Kozak W. The inci-dence of candidiasis amongst the asymptomatic female students of the University of Jos, Nigeria. Mycopathologia 1987; 99(3):135-41.
  21. Clark TA, Slavinski SA, Morgan J, Lott T, Arthington-Skaggs BA, Brandt ME, et al. Epi-demiologic and molecular characterization of an outbreak of Candida parapsilosis bloodstream infections in a community hospital. J Clin Mi-crobiol 2004; 42(10): 4468-72.
  22. Ghahri M, Mirhendi H, Yadegari M H, Hajiza-deh E, Shidfar M. Identification of pathogenic yeasts isolates from nail fungal infections in Tehran using PCR and enzyme digestion. J Med Sci. 2010; 1: 79-91
  23. Fattahi M, Shokohi T, Hashemi Sooteh MB. Molecular identification of C. albicans isolates from onchology patients in four educational-therapeutic centre in Mazandaran.Journal of Mazandaran University of Medical Sciences 2007; 17:10-1.
  24. Scandari A, Mesbah Namin A R, Yadegari M H. Usage of PCR method for identification of main pathogenic species of candida in patients with acute candidiasis. J Kosa Med. 2008; 13: 115-124.
  25. Capoor MR, Nair D, Deb M, Verma PK, Sri-vastava L, Aggarwal P. Emergence of non-albicans Candida species and antifungal re-sistance in a tertiary care hospital. Jpn J Infect Dis 2005; 58(6): 344-8.
  26. Mirhendi S H, Adin H, Shidfar MR, Kordbacheh P, Hashemi SJ, Moazeni M, Hosseinpur L, Re-zaie Matehkolaie A. Identification of pathogenic Candida species: PCR-FSP method. Tehran Uni-versity Medical Journal 2008; 9: 639-645.
  27. Mirhendi SH, Kordbacheh P, Pezeshki M, Khorramizadeh R. Simple and rapid identifica-tion medically important Candida species by a PCR restriction enzyme method. Acta Medica Iranica. 2003; 41(2): 79-83.
  28. Pakshir K, Yazdani M, Kimiaghalam R. Etiology of vaginal candidiasis in Shiraz, southern Iran. Research J of Microb. 2007; 2(9): 696-700.
مجله دانشکده پزشکی اصفهان
دوره 29، شماره 133 - شماره پیاپی 133
خرداد و تیر 1390
صفحه 336-343

فایل ها

سابقه مقاله

  • تاریخ دریافت: 04 اسفند 1389
  • تاریخ بازنگری:
  • تاریخ پذیرش: 17 فروردین 1401

هم رسانی

ارجاع به این مقاله

آمار