تأثیر بیوسورفکتانت‌های استخراج‌شده از لاکتوباسیلوس‌های کازیی و روتری بر بیان ژن‌های gtfB/C و ftf در استرپتوکوکوس موتانس

نوع مقاله : مقاله های پژوهشی

نویسندگان

1 دانشیار، گروه پروتزهای دندانی، دانشکده‌ی دندان‌پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران

2 کارشناس ارشد، مرکز تحقیقات بیماری‌های ارثی کودکان و گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران

3 دانشیار، مرکز تحقیقات بیماری‌های ارثی کودکان و گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران

چکیده

مقدمه: تا کنون راه‌های متداول برای پیشگیری از شیوع پوسیدگی دندان مؤثر واقع نگردیده‌اند. در این مطالعه‌ تأثیر بیوسورفکتانت‌‌های خالص‌سازی‌شده از سویه‌های لاکتوباسیلوس کازیی (ATCC39392) و لاکتوباسیلوس روتری (DSM20016) بر روی بیان ژن‌های gtfB/C (Glucosyltransferase B/C) و ftf (Fructosyltransferase) از سوش استاندارد استرپتوکوکوس موتانس (ATCC35668) بررسی گردید.روش‌ها: نمونه‌های لاکتوباسیلوس و استرپتوکوکوس موتانس از مرکز کلکسیون قارچ‌ها و باکتری‌های صنعتی ایران تهیه گردید. برای تشکیل بیوفیلم از روش میکروتیتر پلیت در حضور 1 درصد سوکروز استفاده شد. تولید و استخراج بیوسورفکتانت با کشت لاکتوباسیلوس‌های کازیی و روتری در محیط کشت MRS Broth و دیالیز و لیوفلیزه نمودن بیوسورفکتانت خالص‌سازی‌شده با دستگاه فریز درایر انجام شد. برای ارزیابی تأثیر بیوسورفکتانت بر فرایند اتصال باکتری، بیان نسبی ژن‌های gtfB/C و ftf در استرپتوکوکوس موتانس (ATCC35668) با استفاده از روش Quantitative real time PCR بررسی گردید.یافته‌ها: بیان ژن‌های gtfB/C و ftf در استرپتوکوکوس موتانس تیمارشده با بیوسورفکتانت‌ها کاهش چشمگیری را نشان داد که از نظر آماری معنی‌دار بود. اثر بیوسورفکتانت لاکتوباسیلوس کازیی بر کاهش بیان ژن‌های مورد مطالعه چمشگیرتر از لاکتوباسیلوس روتری بود.نتیجه‌گیری: باتوجه به کاهش بیان ژن‌های gtfB/C و ftf در استرپتوکوکس موتانس‌های تیمارشده، مشخص می‌شود که بیوسورفکتانت‌های مورد استفاده در کنترل فرایند اتصال باکتری و در ادامه‌ی تشکیل پلاک دندانی بسیار موفق عمل کرده‌اند.

کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله [English]

Effects of Biosurfactants Derived from Lactobacillus Casei and Lactobacillus Reuteri on Gene Expression Profile of gtfB/C and ftf Genes in Lactobacillus Mutans

نویسندگان [English]

  • Rasoul Salehi 3
  • Mohammad Kazemi 2
1 Associate Professor, Department of Dental Prosthetics, School of Dentistry, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran
2 Pediatric Inherited Diseases Research Center AND Department of Genetics and Molecular Biology, School of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran
3 Associate Professor, Pediatric Inherited Diseases Research Center AND Department of Genetics and Molecular Biology, School of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran
چکیده [English]

Background: Dental caries is a worldwide health problem involving almost all age groups in underdeveloped as well as developed countries. So for no considerable progress achieved in the disease prevention, so new preventive/thrapeutique measures are urgently needed. Probiotic bacteria and their biproducts, like biosurfactants, are cost-effective with no considerable side effects for dental caries prevention. The aim of the present study was to evaluate the effects of biosurfactants purified from Lactobacillus casei (ATCC39392) and Lactobacillus reuteri (DSM20016) on ftf and gtf B/C gene expression level of the standard strains of streptococcus mutans (ATCC35668).Methods: Lactobacillus species purchased from the bacterial collection center of Iran. For biofilm production, microtiter plate assay in presence of 1% glucose was used. For biosurfactant production, lactobacillus species were cultured in MRS broth medium, dialyzed and lyophilized using freeze-dryer. To evaluate the effects of biosurfactant on gene expression, bacterial cells were cultured in presence of the appropriate biosurfactant (2.5 mg/ml); after four hours incubation, total cellular RNA was then extracted and used for cDNA synthesis.Findings: Expression of ftf and gtf B/C genes of the standard strains of Streptococcus mutans (ATCC35668) was considerably down regulated by the application of the biosurfactants. The reduction in gene expression was statistically significant (P < 0.05).Conclusion: Considerable down regulation of all genes in presence of biosurfactants was observed. Therefore, it is concluded that the biosurfactants prepared in this study is very successful in dental caries prevention.

کلیدواژه‌ها [English]

  • gtfB/C gene
  • ftf gene
  • Biosurfactant
  • Real time quantitative polymerase chain reaction

مراجع

  1. Marsh PD. Dental plaque as a biofilm and a microbial community - implications for health and disease. BMC Oral Health 2006; 6(Suppl 1): S14.
  2. Kuramitsu HK. Virulence factors of mutans streptococci: role of molecular genetics. Crit Rev Oral Biol Med 1993; 4(2): 159-76.
  3. Matsui R, Cvitkovitch D. Acid tolerance mechanisms utilized by Streptococcus mutans. Future Microbiol 2010; 5(3): 403-17.
  4. Burne RA. Oral streptococci... products of their environment. J Dent Res 1998; 77(3): 445-52.
  5. Li Y, Burne RA. Regulation of the gtfBC and ftf genes of Streptococcus mutans in biofilms in response to pH and carbohydrate. Microbiology 2001; 147(Pt 10): 2841-8.
  6. Yamashita Y, Bowen WH, Burne RA, Kuramitsu HK. Role of the Streptococcus mutans gtf genes in caries induction in the specific-pathogen-free rat model. Infect Immun 1993; 61(9): 3811-7.
  7. Facklam R. What happened to the streptococci: overview of taxonomic and nomenclature changes. Clin Microbiol Rev 2002; 15(4): 613-30.
  8. Beighton D. The complex oral microflora of high-risk individuals and groups and its role in the caries process. Community Dent Oral Epidemiol 2005; 33(4): 248-55.
  9. Marsh PD. Microbiology of dental plaque biofilms and their role in oral health and caries. Dent Clin North Am 2010; 54(3): 441-54.
  10. Ajdic D, McShan WM, McLaughlin RE, Savic G, Chang J, Carson MB, et al. Genome sequence of Streptococcus mutans UA159, a cariogenic dental pathogen. Proc Natl Acad Sci U S A 2002; 99(22): 14434-9.
  11. Caglar E, Kargul B, Tanboga I. Bacteriotherapy and probiotics' role on oral health. Oral Dis 2005; 11(3): 131-7.
  12. Thomas JG, Nakaishi LA. Managing the complexity of a dynamic biofilm. J Am Dent Assoc 2006; 137(Suppl): 10S-5S.
  13. Arweiler NB, Lenz R, Sculean A, Al-Ahmad A, Hellwig E, Auschill TM. Effect of food preservatives on in situ biofilm formation. Clin Oral Investig 2008; 12(3): 203-8.
  14. Llena PC, Forner NL. Evidence concerning the medical management of caries. Med Oral Patol Oral Cir Bucal 2008; 13(5): E325-E330.
  15. Scheie AA, Petersen FC. The biofilm concept: consequences for future prophylaxis of oral diseases? Crit Rev Oral Biol Med 2004; 15(1): 4-12.
  16. Hillman JD, Brooks TA, Michalek SM, Harmon CC, Snoep JL, van Der Weijden CC. Construction and characterization of an effector strain of Streptococcus mutans for replacement therapy of dental caries. Infect Immun 2000; 68(2): 543-9.
  17. Marsh PD, Devine DA. How is the development of dental biofilms influenced by the host? J Clin Periodontol 2011; 38(Suppl 11): 28-35.
  18. Rodrigues L, van der Mei H, Banat IM, Teixeira J, Oliveira R. Inhibition of microbial adhesion to silicone rubber treated with biosurfactant from Streptococcus thermophilus A. FEMS Immunol Med Microbiol 2006; 46(1): 107-12.
  19. Cameotra SS, Makkar RS, Kaur J, Mehta SK. Synthesis of biosurfactants and their advantages to microorganisms and mankind. Adv Exp Med Biol 2010; 672: 261-80.
  20. Marco ML, Kleerebezem M. Assessment of real-time RT-PCR for quantification of Lactobacillus plantarum gene expression during stationary phase and nutrient starvation. J Appl Microbiol 2008; 104(2): 587-94.
  21. Kubista M, Andrade JM, Bengtsson M, Forootan A, Jonak J, Lind K, et al. The real-time polymerase chain reaction. Mol Aspects Med 2006; 27(2-3): 95-125.
  22. Yuan JS, Reed A, Chen F, Stewart CN. Statistical analysis of real-time PCR data. BMC Bioinformatics 2006; 7: 85.
  23. Shakeri S, Kermanshahi RK, Moghaddam MM, Emtiazi G. Assessment of biofilm cell removal and killing and biocide efficacy using the microtiter plate test. Biofouling 2007; 23(1-2): 79-86.
  24. Stepanovic S, Vukovic D, Dakic I, Savic B, Svabic-Vlahovic M. A modified microtiter-plate test for quantification of staphylococcal biofilm formation. J Microbiol Methods 2000; 40(2): 175-9.
  25. Huang M, Meng L, Fan M, Hu P, Bian Z. Effect of biofilm formation on virulence factor secretion via the general secretory pathway in Streptococcus mutans. Arch Oral Biol 2008; 53(12): 1179-85.
  26. Yoshida A, Kuramitsu H. Streptococcus mutans biofilm formation: utilization of a gtfB promoter-green fluorescent protein (PgtfB::gfp) construct to monitor development. Microbiology 2002; 148(Pt 11): 3385-94.
  27. Rodrigues L, Banat IM, Teixeira J, Oliveira R. Strategies for the prevention of microbial biofilm formation on silicone rubber voice prostheses. J Biomed Mater Res B Appl Biomater 2007; 81(2): 358-70.
  28. Rodrigues L, van Der Mei HC, Teixeira J, Oliveira R. Influence of biosurfactants from probiotic bacteria on formation of biofilms on voice prostheses. Appl Environ Microbiol 2004; 70(7): 4408-10.
مجله دانشکده پزشکی اصفهان
دوره 31، شماره 260 - شماره پیاپی 260
آذر و دی 1392
صفحه 1829-1835

فایل ها

سابقه مقاله

  • تاریخ دریافت: 02 آبان 1392
  • تاریخ بازنگری: 11 آبان 1403
  • تاریخ پذیرش: 17 فروردین 1401

هم رسانی

ارجاع به این مقاله

آمار