مقایسه‌ی نتایج روش‌های واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (Polymerase chain reaction) و اگزاسیلین آگار دایلوشن در تعیین مقاومت به متی‌سیلین در سویه‌های استافیلوکوکوس اورئوس ایزوله شده از بیمارستان الزهرای اصفهان

نوع مقاله : مقاله های پژوهشی

نویسندگان

1 دانشیار، گروه میکروب شناسی، دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران

2 دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه میکروب شناسی، دانشکده پزشکی و کمیته‌ی تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران

چکیده

مقدمه: استافیلوکوکوس اورئوس یکی از باکتری‌های مهم عفونی است و بیماری‌زایی این باکتری در جامعه و بیمارستان از اهمیت بسزایی برخوردار می‌باشد. این باکتری قسمتی از فلور نرمال انسان بوده که در مجاری تنفسی فوقانی 25 درصد افراد سالم وجود دارد و باعث طیف وسیعی از بیماری‌ها، از عفونت‌های پوستی تا عفونت‌های بسیار شدید و مهاجم شامل سپتیسمی، اندوکاردیت، پنومونی و آبسه‌های عمیق پوستی می‌شود. استافیلوکوکوس اورئوس از عوامل مهم عفونت‌های شدید بیمارستانی و جامعه است. در این بین سویه‌های مقاوم به متی‌سیلین این باکتری شیوع مرگ و میر بالایی دارند. بنابراین برای کنترل عفونت‌های بیمارستانی باید درصد شیوع سویه‌های مقاوم به متی‌سیلین را به سرعت شناسایی و اقدامات درمانی را برای کنترل این عفونت‌ها انجام داد.روش‌ها: 114 سویه استافیلوکوکوس اورئوس از نمونه‌های مختلف بالینی موجود در بیمارستان الزهرا (س) جدا شد. حداقل غلظت مهار کنندگی اگزاسیلین (MIC) با روش آگار دایلوشن برای سویه‌های مقاوم به متی‌سیلین تعیین و PCR برای ژن‌های mecA انجام گرفت.یافته‌ها: از بین 114 نمونه گرفته شده، 35 نمونه دارای ژن mecA بودند که به وسیله روش آگار دایلوشن مورد بررسی قرار گرفتند. حداقل غلظت مهار کنندگی (MIC) در روش آگار دایلوشن برای اگزاسیلین طبق قوانین CLSI، 8 میکروگرم بر میلی‌لیتر بود و نتایج ثبت شد. سپس برای تمامی سویه‌ها PCR ژن mecA انجام شد و نتایج با روش آگار دایلوشن مقایسه گردید. در بین سویه‌های مقاوم، 4 درصد دارای ژن mecA بوده که در روش فنوتیپی بیان نشده بود و این سویه‌ها حساس به متی‌سیلین بودند. سپس PCR برای ژن‌های mecA انجام شد.نتیجه‌گیری: روش آگار دایلوشن برای تعیین حساسیت آنتی بیوتیکی نسبت به روش دیسک دیفیوژن از حساسیت بیشتری برخوردار بود. با این وجود، روش PCR بهترین روش برای شناسایی سویه‌های مقاوم و حساس به متی‌سیلین می‌باشد. از آن جایی که بعضی از سویه‌ها در آزمایش‌های فنوتیپی نسبت به اگزاسیلین حساس بوده، ولی دارای ژن mecA بودند؛ ژن mecA آن‌ها توسط PCR مورد شناسایی قرار گرفت.

کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله [English]

Comparison of the Results of Polymerase Chain Reaction and Oxacillin Agar Dilution Methods in Determining Resistance to Methicillin in Isolated Staphylococcus Aureus at Alzahra Hospital, Isfahan, Iran

نویسندگان [English]

  • Sayed Asghar Havaei 1
  • Mohsen Karbalaeizadeh babaki 2
  • Ebtehaj Pishva 1
1 Associate Professor, Department of Microbiology, School of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran
2 MSc Student, Student Research Committee, Department of Microbiology, School of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran
چکیده [English]

Background: Staphylococcus aureus is an important infectious bacterium. The pathogenicity of this bacterium is critical in both society and hospital. It is a human normal flora that exists in the upper respiratory tract of 25% of healthy individuals. It causes a wide spectrum of diseases ranging from skin infections to severe infections including septicemia, endocarditis, pneumonia, and skin abscess. S. aureus is a considerable factor of severe infections in both society and hospital. Methicillin resistant S. aureus (MRSA) strains have high mortality rates. Therefore, the rate of MRSA must be quickly identified and controlled with treating measures.Methods: A total number of 114 strains of S. aureus were obtained from the specimens at Alzahra Hospital, Isfahan, Iran. Minimum inhibitory concentration (MIC) of oxacillin for MRSA was performed with agar dilution method and eventually polymerase chain reaction (PCR) for mecA gene.Findings: Out of 114 samples, 35 isolates had mecA gene that were assessed with agar dilution method. According to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), MIC of oxacillin in agar dilution method was 8 µg/ml and results was recorded. MecA gene PCR was conducted for all strains and the results were compared with agar dilution method. From resistant isolates, 4% of the strains had mecA gene but were susceptible to methicillin in phenotypic method. Conclusion: Our study showed agar dilution method to be more sensitive and specific than disk diffusion method. PCR is the best method to indentify susceptible and resistant strains to methicillin. Some strains were susceptible to oxacillin in phenotypic method but their mecA gene was identified with PCR.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Staphylococcus aureus
  • MecA gene
  • Methicillin resistant strains

مراجع

  1. Crisostomo MI, Westh H, Tomasz A, Chung M, Oliveira DC, de LH. The evolution of methicillin resistance in Staphylococcus aureus: similarity of genetic backgrounds in historically early methicillin-susceptible and -resistant isolates and contemporary epidemic clones. Proc Natl Acad Sci U S A 2001; 98(17): 9865-70.
  2. Simor AE, Ofner-Agostini M, Bryce E, Green K, McGeer A, Mulvey M, et al. The evolution of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Canadian hospitals: 5 years of national surveillance. CMAJ 2001; 165(1): 21-6.
  3. Hiramatsu K, Cui L, Kuroda M, Ito T. The emergence and evolution of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Trends Microbiol 2001; 9(10): 486-93.
  4. Ma XX, Ito T, Tiensasitorn C, Jamklang M, Chongtrakool P, Boyle-Vavra S, et al. Novel type of staphylococcal cassette chromosome mec identified in community-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus strains. Antimicrob Agents Chemother 2002; 46(4): 1147-52.
  5. Jevons MP. Celbenin-resistant staphylococci. Br Med J 1961; 1(5219): 124-5.
  6. STEWART GT, HOLT RJ. Evolutio of natural resistance to the newer penicillins. Br Med J 1963; 1(5326): 308-11.
  7. Sabath LD, Wallace SJ. The problems of drug-resistant pathogenic bacteria. Factors influencing methicillin resistance in staphylococci. Ann N Y Acad Sci 1971; 182: 258-66.
  8. Hartman BJ, Tomasz A. Low-affinity penicillin-binding protein associated with beta-lactam resistance in Staphylococcus aureus. J Bacteriol 1984; 158(2): 513-6.
  9. Trindade PA, McCulloch JA, Oliveira GA, Mamizuka EM. Molecular techniques for MRSA typing: current issues and perspectives. Braz J Infect Dis 2003; 7(1): 32-43.
  10. Chang FY, MacDonald BB, Peacock JE, Jr., Musher DM, Triplett P, Mylotte JM, et al. A prospective multicenter study of Staphylococcus aureus bacteremia: incidence of endocarditis, risk factors for mortality, and clinical impact of methicillin resistance. Medicine (Baltimore) 2003; 82(5): 322-32.
  11. Hookey JV, Edwards V, Cookson BD, Richardson JF. PCR-RFLP analysis of the coagulase gene of Staphylococcus aureus: application to the differentiation of epidemic and sporadic methicillin-resistant strains. J Hosp Infect 1999; 42(3): 205-12.
  12. Vannuffel P, Laterre PF, Bouyer M, Gigi J, Vandercam B, Reynaert M, et al. Rapid and specific molecular identification of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in endotracheal aspirates from mechanically ventilated patients. J Clin Microbiol 1998; 36(8): 2366-8.
  13. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Protocols for evaluating dehydrated Mueller-Hinton agar.1996 Approved standard, lst ed. NCCLS document M6-A. Available to URL: http://www.iso90.ir/phocadownload/csli/M06-A.pdf. 2012. Ref Type: Generic
  14. PA: Clinical and laboratory standards institute. CLSI (2006a). Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically. Approved standard, CLSI document M7-A7. Wayne. Available to URL: http://www.iso90.ir/phocadownload/csli/M7-A7.pdf. 2012. Ref Type: Generic
  15. Bosgelmez-Tinaz G, Ulusoy S, Aridogan B, Coskun-Ari F. Evaluation of different methods to detect oxacillin resistance in Staphylococcus aureus and their clinical laboratory utility. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2006; 25(6): 410-2.
  16. Jana M, Robert Skov, Swenson, Jean B.Patel. The cefoxitin disk test-what a clinical microbiologist needs to know. Clinical microbiology newsletter 2007; 29(5): 33-40.
  17. Cekovska Z, Panovski N, Petrovska M. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: comparison of susceptibility test methods with mecA gene analysis for determining oxacillin (methicillin) resistance in our clinical isolates. Bratisl Lek Listy 2005; 106(4-5): 163-7.
  18. Hhmabindu M, Sugapriya Muthamilselvan, et al. Molecular analysis of coagulase gene polymorphism in clinical isolates of methicilin resistant staphylococcus aureus by restriction fragment length polymorphism based genotyping. American Jornal of Infectious Disease 2009; 5(2): 170-6.
  19. Goh SH, Byrne SK, Zhang JL, Chow AW. Molecular typing of Staphylococcus aureus on the basis of coagulase gene polymorphisms. J Clin Microbiol 1992; 30(7): 1642-5.
  20. Schlegelova J, Dendis M, Benedik J, Babak V, Rysanek D. Staphylococcus aureus isolates from dairy cows and humans on a farm differ in coagulase genotype. Vet Microbiol 2003; 92(4): 327-34.
  21. Janwithayanuchit I, Paungmoung P, Ngam-ululert S, Rangsipanuratn W. Epidemiologic study of methicillin-resistant staphylococcus aureus by coagulase gene polymorphism. 127-132. 2006. Ref Type: Generic
  22. Kobayashi N, Taniguchi K, Kojima K, Omizu Y, Uehara N, Kurokawa I, et al. Analysis of methicillin-resistant and methicillin-susceptible staphylococcus aureus by a molecular typing method based on coagulase gene polymorphisms. Epidemiol Infect 1995; 115(3): 419-26.
  23. Perez LRR, Dias C+, d'Azevedo PA. Agar dilution and agar screen with cefoxitin and oxacillin: what is known and what is unknown in detection of meticillin-resistant Staphylococcus aureus. J Med Microbiol 2008; 57(8): 954-6.
  24. Skov R, Smyth R, Larsen AR, Bolmstrom A, Karlsson A, Mills K, et al. Phenotypic detection of methicillin resistance in Staphylococcus aureus by disk diffusion testing and Etest on Mueller-Hinton agar. J Clin Microbiol 2006; 44(12): 4395-9.
  25. Wannet WJ, Spalburg E, Heck ME, Pluister GN, Willems RJ, De Neeling AJ. Widespread disse mination in The Netherlands of the epidemic berlin methicillin-resistant Staphylococcus aureus clone with low-level resistance to oxacillin. J Clin Microbiol 2004; 42(7): 3077-82.
  26. Appelbaum PC. MRSA--the tip of the iceberg. Clin Microbiol Infect 2006; 12 Suppl 2: 3-10.
  27. Ravinder Kumar, Yadav B.R, Kapil Dev, Singh R.S. A simple protocol for DNA extraction from staphylococcus aureus. Available to URL: http://www.protocol-online. org/prot/Protocols/A-Simple-Protocol-for-DNA-Extraction-from-Staphylococcus-Aureus-4999.html. 2008Ref Type: Generic
  28. Swenson JM, Spargo J, Tenover FC, Ferraro MJ. Optimal inoculation methods and quality control for the NCCLS oxacillin agar screen test for detection of oxacillin resistance in Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol 2001; 39(10): 3781-4.
  29. Naderi Nasab M, Tavakol Afshari J, Nazim M, Fateh Manesh, Khodadust M.A, Faramarzi H. Methicillin-resistant staphylococcus aureus determined by phenotypic methods. Med J Mashad Univ Med Sci 2005; 48(1): 7-16.
  30. Rahbar M, Yaghoobi M, Fattahi A. Comparison of different laboratory methods for detection of methicillin-resistant staphylococcus aureus. Pak J Med Sci 2006; 22(4): 442-5.
  31. Fatholahzadeh B, Emaneini M, Gilbert G, Udo E, Aligholi M, Modarressi MH, et al. Staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) analysis and antimicrobial susceptibility patterns of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolates in Tehran, Iran. Microb Drug Resist 2008; 14(3): 217-20.
  32. Adaleti R, Nakipoglu Y, Karahan ZC, Tasdemir C, Kaya F. Comparison of polymerase chain reaction and conventional methods in detecting methicillin-resistant Staphylococcus aureus. J Infect Dev Ctries 2008; 2(1): 46-50.
  33. Japoni A, Alborzi A, Orafa F, Rasoli M, Farshad S. Distribiotion patterns of methicillin resistance genes (mecA) in staphylococcus aureus isolated from clinical from specimens. Iran Biomed J 2004; 8(4): 173-8.
مجله دانشکده پزشکی اصفهان
دوره 29، شماره 151 - شماره پیاپی 151
مهر و آبان 1390
صفحه 1175-1182

فایل ها

سابقه مقاله

  • تاریخ دریافت: 13 مهر 1390
  • تاریخ بازنگری: 31 فروردین 1403
  • تاریخ پذیرش: 17 فروردین 1401

هم رسانی

ارجاع به این مقاله

آمار