شناسایی گونه‌های کاندیدا در بیماران مبتلا به ولوواژینیت کاندیدایی در شهر کاشان با استفاده از روش PCR-RFLP

نوع مقاله : مقاله های پژوهشی


1 گروه قارچ شناسی پزشکی، دانشکده‌ی علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

2 کارشناس ارشد، گروه انگل شناسی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی کاشان، کاشان، ایران

3 استادیار، گروه زنان، دانشکده‌ی پزشکی و مرکز تحقیقات تروما، دانشگاه علوم پزشکی کاشان، کاشان، ایران

4 دانشیار، گروه انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران


مقدمه: ولوواژینیت کاندیدایی (Vulvovaginal candidiasis یا VVC)، عفونت واژینال رایجی است که در حدود 75 درصد زنانی که در سنین باروری قرار دارند، دیده می‌شود و در 5 درصد از آن‌ها به صورت عود یابنده مشاهده می‌شود. کاندیدا آلبیکنس عامل اصلی بیماری با شیوع تقریبی 90-80 درصد است و گونه‌های غیر آلبیکنس (اغلب کاندیدا گلابراتا) در درجه‌ی بعدی قرار دارند. تشخیص دقیق گونه‌های عامل این عفونت برای اهداف اپیدمیولوژیک ضروری و برای درمان مناسب مفید می‌باشد.روش‌ها: در خلال سال‌های 88-1386، تعداد 133 جدایه‌ی مخمری از کلینیک تخصصی زنان وابسته به دانشگاه علوم پزشکی کاشان جداسازی شد. DNA ژنومی مخمرهای جدا شده از بیماران، با استفاده از فیلترهای FTA، از کشت تازه استخراج گردید و سپس، ناحیه‌ی ITS1-ITS2 آن با روش PCR (Polymerase chain reaction) تکثیر و با آنزیم HpaII برش داده شد. محصولات RFLP (Restriction fragment length polymorphism) روی ژل آگاروز، الکتروفورز و گونه‌ی مخمر بر حسب تفاوت الگوی باند‌های به دست آمده شناسایی گردید.یافته‌ها: گونه‌ی غالب جدا شده از نمونه‌های بالینی کاندیدا آلبیکنس شامل 116مورد (2/87 درصد) و به دنبال آن دو گونه‌ی گلابراتا 16 مورد (12 درصد) و کفیر یک مورد (7/0 درصد) بود. گروه سنی 40-31 سال بیشترین و گروه سنی 20-11 سال کمترین موارد ابتلاء را به خود اختصاص دادند.نتیجه‌گیری: همانند اکثر مطالعات انجام شده در این زمینه، در مطالعه‌ی حاضر نیز کاندیدا آلبیکنس گونه‌ی غالب جداسازی شده از ولوواژینیت کاندیدایی بود. با توجه به دقت و سرعت روش‌های مولکولی و این که تا به حال هیچ گونه مطالعه‌ای با روش PCR-RFLP برای تشخیص دقیق عوامل علیتی VVC در ایران انجام نشده است، استفاده از این روش در بررسی‌های اپیدمیولوژیک در سایر مطالعات توصیه می‌شود.


عنوان مقاله [English]

Identification of Candida Species among Patients with Vulvovaginal Candidiasis in Kashan by PCR-RFLP Method

نویسندگان [English]

  • Rasoul Mohammadi 1
  • Mehdi Nazeri 2
  • Elaheh Mesdaghinia 3
  • Seyed Hossein Mirhendi 4
1 Department of Medical Mycology, School of Medicine, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
2 Department of Parasitology, School of Medicine, Kashan University of Medical Sciences, Kashan, Iran
3 Assistant Professor, Department of Obstetrics and Gynecology and Trauma Research Center, Kashan University of Medical Sciences, Kashan, Iran
4 Associate Professor, Department of Medical Parasitology and Mycology, School of Public Health and National Institute of Health Research, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran
چکیده [English]

Background: Vulvovaginal candidiasis (VVC) is a common vaginal infection, affecting up to 75% of women in child-bearing age. Approximately 5% of patients may experience recurrent VVC. Candida albicans is the most common causative agent with a prevalence of approximately 70–90%. Non-albicans Candida species, predominantly Candida glabrata, are responsible for the remainder. Precise diagnosis of causative agents of VVC is necessary for epidemiological purposes and for effective treatment.Methods: One hundred and thirty three yeast isolates were collected from a gynecology clinic affiliated to Kashan University, Iran, during 2007-2009. Genomic DNA of each isolate was extracted from fresh cultures using FTA-card. The ITS1-ITS2 region was amplified by polymerase chain reaction (PCR) assay and was digested by the restriction enzyme HpaII. The products of restriction fragment length polymorphism (RFLP) were electrophoresed on agarose gel and the yeast species were determined according to differences in their electrophoretic band patterns.Findings: Prominent species isolated from clinical specimens were Candida albicans responsible for 116 cases (87.2%), followed by 16 cases of C. glabrata (12%) and 1 case of C. kefyr (0.7%). The age bracket of 31-40 years had the highest and the age bracket of 11-20 years had the lowest frequency of occurrence.Conclusion: Like the majority of similar studies performed in this field, the present study found Candida albicans as predominant species isolated from vulvovaginal candidiasis. As molecular diagnostic methods are rapid and reliable and as there are no any other studies that used PCR-RFLP for diagnosis of etiologic agents of VVC in Iran, we recommend this approach for other similar epidemiological studies.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Candida
  • Vulvovaginitis
  1. Fan SR, Bai FY, Liao QP, Liu ZH, Li J, Liu XP. Genotype distribution of Candida albicans strains associated with different conditions of vulvovaginal candidiasis, as revealed by mi-crosatellite typing. Sex Transm Infect 2008; 84(2): 103-6.
  2. White DJ, Vanthuyne A. Vulvovaginal candidia-sis. Sex Transm Infect 2006; 82(Suppl 4): iv28-iv30.
  3. Sobel JD, Faro S, Force RW, Foxman B, Ledger WJ, Nyirjesy PR, et al. Vulvovaginal candidiasis: epidemiologic, diagnostic, and therapeutic con-siderations. Am J Obstet Gynecol 1998; 178(2): 203-11.
  4. Sobel JD, Kapernick PS, Zervos M, Reed BD, Hooton T, Soper D, et al. Treatment of compli-cated Candida vaginitis: comparison of single and sequential doses of fluconazole. Am J Ob-stet Gynecol 2001; 185(2): 363-9.
  5. White DJ, Habib AR, Vanthuyne A, Langford S, Symonds M. Combined topical flucytosine and amphotericin B for refractory vaginal Candida glabrata infections. Sex Transm Infect 2001; 77(3): 212-3.
  6. Geiger AM, Foxman B, Sobel JD. Chronic vul-vovaginal candidiasis: characteristics of women with Candida albicans, C glabrata and no can-dida. Genitourin Med 1995; 71(5): 304-7.
  7. Sobel JD. Vulvovaginal candidosis. Lancet 2007; 369(9577): 1961-71.
  8. Sobel JD. Vaginitis. N Engl J Med 1997; 337(26): 1896-903.
  9. Lindua ST, Mendosa K, Surawska H, Jordan JA. Vaginal Swab Measurement of Candidiasis in Wave I of the National Social Life Health & Ag-ing Project. NSHAP Biomeasures Technical Re-port; 2008.
  10. Sobel JD. Genital candidiasis. Med 2005: 33(10); 62-5.
  11. Kwok S, Higuchi R. Avoiding false positives with PCR. Nature 1989; 339(6221): 237-8.
  12. Elie CM, Lott TJ, Reiss E, Morrison CJ. Rapid identification of Candida species with species-specific DNA probes. J Clin Microbiol 1998; 36(11): 3260-5.
  13. Mohammadi R, Mirhendi SH, Yadegari MH, Shadzi S, Jalalizand N. Identification and fre-quency of Candida species in patients with dif-ferent forms of Candidiasis in Isfahan, using PCR-RFLP method. Journal of Isfahan Medical school 2011; 29(133): 336-43.
  14. Mohammadi R, Mirhendi SH, Yadegari MH, Ghahri M, Shadzi S, Jalalizand N, et al. Evalua-tion of prevalence of the new Candida species (C. Orthopsilosis and C. Metapsilosis) among C. Parapsilosis group isolated from patients by PCR-RFLP of SADH Gene in Iran. Journal of Is-fahan Medical school 2011; 29(134): 376-85.
  15. Borman AM, Linton CJ, Miles SJ, Campbell CK, Johnson EM. Ultra-rapid preparation of total ge-nomic DNA from isolates of yeast and mould using Whatman FTA filter paper technology - a reusable DNA archiving system. Med Mycol 2006; 44(5): 389-98.
  16. Mirhendi H, Makimura K, Khoramizadeh M, Yamaguchi H. A one-enzyme PCR-RFLP assay for identification of six medically important Candida species. Nihon Ishinkin Gakkai Zasshi 2006; 47(3): 225-9.
  17. Darce BM, Gonzalez A, Barnabe C, Larrouy G. First characterization of Candida albicans by random amplified polymorphic DNA method in Nicaragua and comparison of the diagnosis methods for vaginal candidiasis in Nicaraguan women. Mem Inst Oswaldo Cruz 2002; 97(7): 985-9.
  18. Cheng G, Yeater KM, Hoyer LL. Cellular and molecular biology of Candida albicans estrogen response. Eukaryot Cell 2006; 5(1): 180-91.
  19. Nyirjesy P, Seeney SM, Grody MH, Jordan CA, Buckley HR. Chronic fungal vaginitis: the value of cultures. Am J Obstet Gynecol 1995; 173(3 Pt 1): 820-3.
  20. Chong PP, Lee YL, Tan BC, Ng KP. Genetic re-latedness of Candida strains isolated from wom-en with vaginal candidiasis in Malaysia. J Med Microbiol 2003; 52(Pt 8): 657-66.
  21. Singh S, Sobel JD, Bhargava P, Boikov D, Vazquez JA. Vaginitis due to Candida krusei: ep-idemiology, clinical aspects, and therapy. Clin Infect Dis 2002; 35(9): 1066-70.
  22. McClelland RS, Richardson BA, Hassan WM, Graham SM, Kiarie J, Baeten JM, et al. Prospec-tive study of vaginal bacterial flora and other risk factors for vulvovaginal candidiasis. J Infect Dis 2009; 199(12): 1883-90.
  23. Richter SS, Galask RP, Messer SA, Hollis RJ, Diekema DJ, Pfaller MA. Antifungal susceptibili-ties of Candida species causing vulvovaginitis and epidemiology of recurrent cases. J Clin Mi-crobiol 2005; 43(5): 2155-62.
  24. Marot-Leblond A, Nail-Billaud S, Pilon F, Beucher B, Poulain D, Robert R. Efficient diag-nosis of vulvovaginal candidiasis by use of a new rapid immunochromatography test. J Clin Microbiol 2009; 47(12): 3821-5.
  25. Mahmoudi Rad M, Zafarghandi A, Abbasabadi B, Amiri Z, Shivayi M, Amel Zabihi M, et al. Identification and comparison of etiologic agents in vulvovaginal candidiasis and recurrent vulvovaginal candidiasis by a differential medi-um. Pejouhesh 2010; 33(3): 189-94.
  26. Jamilian M, Mashadi E, Sarmadi F, Banijamali M, Farhadi E, Ghanatpishe E. Frequancy of vul-vovaginal Candidiasis species in nonpregnant 15-50 years old women in spring 2005 in Arak. Arak Medical University Journal 2007; 10(2): 7-14.
  27. Aghamirian MR, Keshavarz D, Jahani Hashemi H, Sadeghi Qazvini M. Agents associated with candida vulvovaginitis in women referred to health centers in Qazvin. The Journal of Qazvin Univ of Med Sci 2007; 11(3): 35-9.