بررسی اپیدمیولوژی مولکولی سویه‌های کریتیدیا در شهر اصفهان و حومه

دودی, منیر; اسلامی, گیلدا; سترکی, محبوبه; حجازی, سید حسین

بررسی اپیدمیولوژی مولکولی سویه‌های کریتیدیا در شهر اصفهان و حومه

نوع مقاله : مقاله های پژوهشی

نویسندگان

¹ استادیار، گروه میکروبیولوژی، دانشکده‌ی علوم زیستی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد فلاورجان، فلاورجان، اصفهان، ایران

² استادیار، گروه انگل‌شناسی و قارچ‌شناسی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی یزد، یزد، ایران

³ استادیار، گروه زیست‌شناسی، دانشکده‌ی علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد ایذه، ایذه، ایران

⁴ دانشیار، گروه انگل‌شناسی و قارچ‌شناسی، دانشکدهی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران

چکیده

مقدمه: ژنوتایپینگ گونه‌های کریتیدیا، جهت انتخاب روش مناسب برای کنترل و پیشگیری از بیماری لیشمانیوز جلدی، تعیین بهتر اثر درمانی داروها و تهیه و ارزیابی واکسن با اهمیت است.روش‌ها: در این مطالعه، به منظور تشخیص سویه‌های کریتیدیا از 602 بیمار مبتلا به لیشمانیوز پوستی نوع مرطوب مراجعه کننده به مرکز تحقیقات پوست و سالک حضرت صدیقه‌ی طاهره (س) در اصفهان و سایر مراکز درمانی حومه‌ی اصفهان، نمونه‌گیری به عمل آمد. در مورد 201 بیمار (39/33 درصد) ابتدا کشت در محیط NNN (Novy-Nicol-Mac Nea) و سپس استخراج DNA از پروماستیگوت‌ها به عمل آمد و سپس روش PCR-RFLP (Polymerase chain reaction -restriction fragment length polymorphism) اجرا شد و ناحیه‌ی 1ITS (1 Internal transcribed spacer) تکثیر و آنزیم HaeIII به کار گرفته شد.یافته‌ها: دو گونه‌ی کریتیدیا به نام‌های کریتیدیا فاسیکولاتا 27 مورد (44/13 درصد) و کریتیدیا لوسیلیا 11 مورد (47/5 درصد) و بقیه تریپانوزماتیده با کد 331988GQ بودند که پس از آنالیز مولکولی، 92 درصد شباهت با کریتیدیا فاسیکولاتا و 89 درصد شباهت با کریتیدیا لوسیلیا نشان دادند و 163 مورد (09/81 درصد) گزارش شدند. از 351 بیمار (31/58 درصد) لیشمانیا جداسازی گردید و از 50 بیمار (31/8 درصد) نه لیشمانیا و نه کریتیدیا جداسازی نشد. سپس نمونه‌ی کشت آن‌ها منفی گزارش گردید.نتیجه‌گیری: در نهایت، نتایج حاصل از این پژوهش نشان داد که نه تنها کریتیدیا به عنوان آلوده کننده‌ی کشت‌های لیشمانیا در اصفهان و مناطق اطراف آن است؛ بلکه دارای پلی مورفیسم ژنتیکی نیز می‌باشد.

کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله [English]

The Molecular Epidemiology of Crithidia Strains in Isfahan City and Surrounding Areas, Iran

نویسندگان [English]

Monir Doudi ¹
Mahbubeh Setorki ²
Gilda Eslami ³
Seyed Hossein Hejazi ⁴

¹ Assistant Professor, Department of Microbiology, School of Biology, Islamic Azad University, Falavarjan Branch, Isfahan, Iran

² Assistant Professor, Department of Biology, School of Basic Sciences, Islamic Azad University, Izeh Branch, Izeh, Iran

³ Assistant Professor Department of Parasitology and Mycology, School of Medicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran

⁴ Associate Professor, Department of Parasitology and Mycology, School of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran

چکیده [English]

Background: Genotyping of Crithidia species is of high importance in the selection of an appropriate method to control and prevent cutaneous leishmaniasis (CL), determination of the best therapeutic effect of drugs, and preparation and evaluation of the vaccines.Methods: In order to identify the strains of Crithidia, sampling was done in one of the endemic regions of wet or rural type zoonotic cutaneous leishmaniasis (ZCL) in Isfahan city and surrounding areas, Iran. Samples were 602 patients with wet cutaneous leishmaniasis referred to Isfahan Leishmaniasis Research Center or other health centers in the vicinity of Isfahan. Sampling in Novy-MacNeal-Nicolle medium (NNN) medium, extraction of DNA from promastigotes, implementation of the polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method, amplification of internal transcribed spacer (ITS1), and application of HaeIII enzyme were performed.Findings: 201 patients (33.39%) were found with two species of Crithidia, 27 cases of Crithidia fasciculata (13.44%) and 11 cases of Crithidia luciliae (5.47%). The rest of the cases, however, were trypanosomatidae with accession number of GQ331988; molecular analysis showed 92% had tendency of homology with Crithidia fasciculata and 89% with Crithidia luciliae (163 cases or 81.9%). Out of 351 patients (58.31%), leishmaniasis parasite was isolated, and out of 50 patients (8.31%), neither Leishmania nor Crithidia were isolated; therefore, their report was negative following cultured samples.Conclusion: The results of the present study suggested that Crithidia not only contaminates leishmania culture but also enjoys genetic polymorphism in Isfahan and surrounding areas.

کلیدواژه‌ها [English]

Polymorphism
Crithidia
Internal transcribed spacer (ITS1)
Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP)

مراجع

World Health Organization. Control of the leishmaniases [Online]. [cited 2010 Mar 22]; Available from: URL: http://whqlibdoc.who.int/trs/WHO_TRS_949_eng.pdf
Doudi M, Hejazi SH, Razavi MR, Narimani M, Khanjani S, Eslami G. Comparative molecular epidemiology of Leishmania major and Leishmania tropica by PCR-RFLP technique in hyper endemic cities of Isfahan and Bam, Iran. Med Sci Monit 2010; 16(11): CR530-CR535.
Garrity G, Brenner DJ, Staley JT, Krieg NR, Boone DR, De Vos P, et al. Bergey's Manual® of Systematic Bacteriology. New York, NY: Springer; 2006. p. 795-836.
Marmur J, Cahoon ME, Shimura Y, Vogel HJ. Deoxyribonucleic Acid Type attributable to a Bacterial Endosymbiote in the Protozoon Crithidia (Strigomonas) oncopelti. Nature 1963; 197: 1228-9.
Mundim MH, Roitman I, Hermans MA, Kitajima EW. Simple nutrition of Crithidia deanei, a reduviid trypanosomatid with an endosymbiont. J Protozool 1974; 21(4): 518-21.
Baker JR, Muller R, Rollinson D. Advances in Parasitology. London, UK: Academic Press; 1998. p. 215-40.
Bailey MS, Lockwood DNJ. Cutaneous leishmaniasis. Clinics in Dermatology 2007; 25(2): 203-11.
Banuls AL, Brisse S, Sidibe I, Noel S, Tibayrenc M. A phylogenetic analysis by multilocus enzyme electrophoresis and multiprimer random amplified polymorphic DNA fingerprinting of the Leishmania genome project Friedlin reference strain. Folia Parasitol (Praha ) 1999; 46(1): 10-4.
El Tai NO. Molecular approaches to direct diagnosis and characterization of Leishmania donovani [Thesis]. Berlin, Germany: Mathematisch-Naturwissenschaftlichen Fakultät I, Der Humboldt-Universität zu Berlin 2002.
Berzunza-Cruz M, Cabrera N, Crippa-Rossi M, Sosa CT, Perez-Montfort R, Becker I. Polymorphism analysis of the internal transcribed spacer and small subunit of ribosomal RNA genes of Leishmania mexicana. Parasitol Res 2002; 88(10): 918-25.
Du Y, Chang KP. PCR amplification and sequence analysis of pre-ribosomal RNA genes from Crithidia endosymbionts, p. 499-504. In: Sato S, Ishida M, Ishikawa H, editors. Endocytobiology. Tiubingen, Germany: Tubingen University Press; 1993.
Tashakori M, Kuhls K, Al-Jawabreh A, Mauricio IL, Schonian G, Farajnia S, et al. Leishmania major: genetic heterogeneity of Iranian isolates by single-strand conformation polymorphism and sequence analysis of ribosomal DNA internal transcribed spacer. Acta Trop 2006; 98(1): 52-8.
Kazemi-Rad E, Mohebali M, Hajjaran H, Rezaei S, Mamishi S. Diagnosis and Characterization of Leishmania Species in Giemsa-Stained slides by PCR-RFLP. Iranian J Publ Health, 2008; 37(1): 54-60.
Schonian G, Akuffo H, Lewin S, Maasho K, Nylen S, Pratlong F, et al. Genetic variability within the species Leishmania aethiopica does not correlate with clinical variations of cutaneous leishmaniasis. Mol Biochem Parasitol 2000; 106(2): 239-48.
Schonian G, Schnur L, El Fari FM, Oskam L, Kolesnikov AA, Sokolowska-Kohler W, et al. Genetic heterogeneity in the species Leishmania tropica revealed by different PCR-based methods. Trans R Soc Trop Med Hyg 2001; 95(2): 217-24.
Cupolillo E, Momen H, Grimaldi G, Jr. Genetic diversity in natural populations of New World Leishmania. Mem Inst Oswaldo Cruz 1998; 93(5): 663-8.
Schonian G, Nasereddin A, Dinse N, Schweynoch C, Schallig HD, Presber W, et al. PCR diagnosis and characterization of Leishmania in local and imported clinical samples. Diagn Microbiol Infect Dis 2003; 47(1): 349-58.
Wang JR, Lee ST, Juan WH, Chuang WL, Hung SI, Chung WH, et al. Indigenous leishmaniasis in Taiwan: report of a case. Int J Dermatol 2008; 47(1): 40-3.
de Souza W, Motta MC. Endosymbiosis in protozoa of the Trypanosomatidae family. FEMS Microbiol Lett 1999; 173(1): 1-8.
Yang BB, Guo XG, Hu XS, Zhang JG, Liao L, Chen DL, et al. Species discrimination and phylogenetic inference of 17 Chinese Leishmania isolates based on internal transcribed spacer 1 (ITS1) sequences. Parasitol Res 2010; 107(5): 1049-65.